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KYNA ELISA KIT(犬尿喹啉酸)

品牌:NEWLF   
价格:1800/2800
规格:48T/96T
货号:NL4201

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KYNA ELISA KIT(犬尿喹啉酸)

品牌:NEWLF   
价格:1800/2800
规格:48T/96T
货号:NL4201
应用:竞争法

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  • 用途

        

        本试剂盒用于测定样本中犬尿喹啉酸(KYNA) 的含量。

     

     


     

    实验原理

     

        本试剂盒应用酶联免疫竞争法测定标本中犬尿喹啉酸(KYNA)水平。用纯化的犬尿喹啉酸(KYNA)抗体包被微孔板制成固相抗体,往包被单抗的微孔中加入犬尿喹啉酸(KYNA),和HRP 标记的犬尿喹啉酸(KYNA)抗原,使它们竞争结合,,经过彻底洗涤后加底物 TMB 显色。样本颜色的深浅和样品中的犬尿喹啉酸(KYNA)的含量呈负相关。用酶标仪在 450nm 波长下测定吸光度(OD 值),通过标准曲线计算样品中犬尿喹啉酸(KYNA)的含量。

     

     


     

    基本性能

     

             

            性能

    灵敏度

     

     

     

    2.5ng/L

     

    检测范围

     

     

    10ng/L-500ng/L

     

    特异性

     

    可检测样本中犬尿喹啉酸(KYNA)浓度。且与其他类似物无明显交叉反应

     

    重复性

     

    板内,板间变异系数均《10%

     

     


     

    试剂盒组份及储存

     

     

                中文名称

    规格

    开封后保存条件

    ELISA 酶标板

     

    96T :  8 孔×12 条

    48T :  8 孔×6 条

    2-8℃ 90天

    标准品

    SI :400ng/L    S2:200ng/L

           S3:100ng/L     S4: 50ng/L   

    S5:25ng/L             

     

    2-8℃ 90天

    HRP标记抗体

     

    96T :  6mlx1

    48T 3mlx1

    2-8℃ 90天

    样品稀释液

     

    96T :  1.5mlx1

    48T 1mlx1

    2-8℃ 180天

    显色剂A

     

    96T :  6mlx1

    48T :  3mlx1

    2-8℃(避光)  180天

    显色剂B

     

    96T :  6mlx1

    48T  3mlx1

    2-8℃(避光)  180天

    终止液

     

    96T :   6mlx1

    48T :  3mlx1

    2-8℃ 180天   180天

    30倍浓缩洗涤液

     

    96T :  20mlx1

    48T 10mlx1

    2-8℃ 180天   180天

    说明书

    1份

     

    质检报告

    1份

     

    密封袋

    1个

     

     

    说明;未拆封的试剂盒可以在2-8℃ 保存六个月.

     

     

    试剂盒所需自备物品。

     

     1.酶标仪(450nm波长滤光片) 

     2.高精度移液器,EP管及一次性吸头:0.5-10μL, 2-20μL, 20-200μL, 200-1000μL 

     3.37℃恒温箱 

     4. 双蒸水或去离子水 

     5. 吸水纸 

     6. 加样槽

     

    样品收集方法(具体处理方法请咨询

     

    1.  血清:用无菌管收集,室温血液自然凝固10-20分钟,2-8℃条件离心20分钟左右  (2000-3000转/分)仔细收集上清,保存过程中  如出现沉淀,应再次离心。

    2.  血浆:应根据标本的要求选择EDTA、肝素钠或柠檬酸钠作为抗凝剂,混合10-20分钟后,2-8℃条件离心20分钟左右(2000-3000转/分),仔细收集上清,保存过程中如有沉淀形成应该再次离心。

    3.  尿液:用无菌管收集,2-8℃条件离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清,保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。

    4. 组织匀浆:用预冷的PBS (0.01M, pH=7.4)冲洗组织,去除残留血液,称重后将剪碎的组织与 对应体积的PBS(一般按1:9的重量体积比,比如1g的组织样品对应9 mL的PBS,具体体积可根据实验需要适 当调整,并做好记录。推荐在PBS中加入蛋白酶抑制剂)加入玻璃匀浆器中,在冰上充分研磨。为了进一步 裂解组织细胞,可以对匀浆液进行反复冻融或超声破碎。最后将匀浆液于2-8℃,5000×g 离心5-10分钟取 上清检测。

    5.  细胞提取液:贴壁 细胞用冷的PBS轻轻清洗,然后用胰蛋白酶消化,1000×g离心5分钟后收集细胞。悬浮 细胞可直接离心收集。收集的细胞用冷的PBS洗涤3次。每106个细胞中加入150-200 μL PBS重悬(推荐在PBS 中加入蛋白酶抑制剂;若含量很低可减少PBS的体积)并通过反复冻融或超声使细胞破碎。将提取液于2-8℃,1500×g离心10分钟,取上清检测。

    6. 细胞培养上清或其他生物体液;收集液体后于2-8℃,1000×g离心20分钟,除去杂质及细胞碎片,取上清检测。

     


     

    试剂盒注意事项

     

    1. 试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡 15-30 分钟后方可使用,酶标包被板开封后如未 用完,板条应装入密封袋中保存。 

    2. 浓洗涤液可能会有结晶析出,稀释时可在水浴中加温助溶,洗涤时不影响结果。 

    3. 各步加样均应使用加样器,并经常校对其准确性,以避免试验误差。一次加样时间最好 控制在 5 分钟内,如标本数量多,推荐使用排枪加样。 

    4. 请每次测定的同时做标准曲线,最好做复孔。如标本中待测物质含量过高(样本 OD 值大于标准品孔第一孔的 OD 值),请先用样品 稀释液稀释一定倍数(n 倍)后再测定,计算时请最后乘以总稀释倍数(n×5) 

    5. 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。 

    6. 底物请避光保存。 

    7. 严格按照说明书的操作进行,试验结果判定必须以酶标仪读数为准. 

    8. 所有样品,洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。 

    9. 本试剂不同批号组分不得混用。

     

    |  标本收集注意事项

     

    1. 若标本为匀浆组织:用丁醇:甲醇:水(5:25:70 V:V:V)配比出来的液体,替代PBS,其余操作一样。
    2. 不能检测含 NaN3 的样品,因 NaN3 抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。
    3. 标本采集后尽快进行实验,若不能马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融。
    4. 我们罗列的是通用的样本处理方法,无法涵盖各种样本,对于一些特殊样本,建议实验人员多参考已发表的文献, 自行设计合理的样本 处理方法。

     

     

    |  操作步骤

     

    1. 加样:分别设标准孔、空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、待测样品孔。在酶标包被板上标准孔中加 50 微升,待测样品  孔中先加样品稀释液 40μl,然后再加待测样品 10μl(样品最终稀释度为 5 倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。
    2. 加酶:每孔加入酶标试剂 50μl,空白孔除外。
    3. 温育:用封板膜封板后置 37℃温育 60 分钟。
    4. 配液:将 30 倍浓缩洗涤液用蒸馏水 30 倍稀释后备用
    5. 洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置 30 秒后弃去,如此重复 5 次,拍干。
    6. 显色:每孔先加入显色剂 A50μl,再加入显色剂 B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色15 分钟.
    7. 终止:每孔加终止液 50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。
    8. 测定:以空白孔调零,450nm 波长依序测量各孔的吸光度(OD 值)。 测定应在加终止液后 15 分钟以内进行。

      

    |  结果判断

     

     1. 每个标准品和标本的OD 值应减去空白孔的OD值。

     2. 以标准品的浓度为横坐标,OD 值为纵坐标,利用计算机软件采用直线回归的拟合方法创建标准曲线方程,通过样本的吸光度(OD值),利用方程计算样品的浓度值。

     3. 若样本的OD值高于标准曲线上限,应适当稀释后重测,计算浓度时应乘以稀释倍数。

     

     

     |  示例曲线

     

     由于实验操作条件的不同(如操作者、移液技术、洗板技术和稳定条件等),标准曲线的OD值会有所差异。详情请看质检报告.

     

     

      

       

     

     

     

     

     

     

     

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